Добавление полигалактоманнана (ПГМ) к агарозным гелям повышает их прозрачность, эластичность и разрешающую способность. Из-за высокой вязкости растворов ПГМ обычно используют его модифицированные производные, подвергнутые частичной деполимеризации. В США и странах Евросоюза они продаются под названием "Synergel". У нас можно приобрести три варианта полигалактоманнана, отличающихся степенью деполимеризации. 

Добавление 1% полигалактоманнана эквивалентно повышению концентрации агарозы на 2%.

ПГМ-1 повышает прочность, эластичность и прозрачность агарозных гелей. Максимальная концентрация добавки – 1%. Рекомендуется для приготовления гелей с разрешающей способностью, эквивалентной 2% агарозы (0,8% агарозы + 0,6% ПГМ-1).

ПГМ-2 (аналог Synergel™) не влияет на прочность агарозных гелей, но повышает их прозрачность. Максимальная концентрация – 2%. Идеально подходит для приготовления гелей с разрешением, эквивалентным разрешению 4% агарозного геля (0,8% агарозы + 0,6% ПГМ-1 + 1% ПГМ-2).

ПГМ-4 можно добавлять до 4%. При концентрации более 2% снижает прочность гелей, что можно компенсировать увеличением содержания агарозы и добавлением ПГМ-1. Может быть использован для приготовления гелей с разрешающей способностью, эквивалентной 8% агарозы (1% агарозы + 0,5% ПГМ-1 + 3% ПГМ-4).

Приготовление агарозных гелей с добавлением ПГМ

Наиболее важная "хитрость" приготовления гелей с ПГМ - устранение образования комков ("клёцек") при суспендировании порошка в буферном растворе. Для этого навески агарозы и ПГМ (делаются в одном стаканчике) нужно суспендировать в минимальном объёме этанола (~ 5 мл на 3...4 г порошка) до получения густой, но вполне текучей суспензии. К этанолу желательно добавить 1% изопропилового спирта (пеногаситель).

Суспензию при интенсивном помешивании перелить в колбу с половиной буферного раствора, а оставшуюся половину использовать для смывания остатков спиртовой суспензии со стенок стаканчика и колбы. Конечный объём буферного раствора должен занимать примерно половину объёма колбы. Горловину закрыть стретч-плёнкой (в ней нужно проколоть небольшие отверстия).

Довести суспензию до кипения в микроволновой печке при регулярном перемешивании, поскольку частички ПГМ оседают на дно колбы и в процессе нагревания без перемешивания начинают растворяться в придонном слое и слипаться. При повышении температуры до 80...90 градусов ПГМ быстро растворяется. При этом вязкость увеличивается, но раствор становится прозрачным.

Прокипятить периодически помешивая, на малой мощности, до исчезновения всех пузырьков. За кипением необходимо следить и не допускать выброса пены из колбы (добавка ИПС устраняет образование мелких пузырьков и облегчает "лопанье" крупных, т.е. заметно упрощает и ускоряет варку). Расплав геля перед заливкой нужно охладить (~60°, не переохлаждать!) и удалить (при необходимости) поверхностную плёнку, которая может образоваться на расплавах с высокой концентрацией ПГМ.